BIBLIOGUÍA 23 CAMARA DE NEUBAWER
CÁMARA DE
NEUBAUER: CARACTERÍSTICAS, USOS
Por Marielsa
Gil
La cámara de Neubauer, hematímetro
o hemocitómetro, es un instrumento de laboratorio que consiste en una placa de
vidrio especial grueso. Esta cámara sirve para realizar recuentos de algunos
tipos celulares como hematíes, glóbulos blancos y plaquetas, aunque puede ser
usado para recuento de esporas, espermatozoides, parásitos, etc.
Presenta unas características muy peculiares, pues
consta de 3 zonas, una central para el recuento y dos zonas de soporte. Cada
cámara posee dos zonas de recuento o retículos, una en la parte superior y otra
en la parte inferior.
Cámara de Neubauer. Fuente: SantiBadia [CC BY-SA
4.0
(https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)].
Imagen editada.
Estos poseen múltiples divisiones en forma cuadriculada. Las zonas de contaje son los cuadros medianos que se encuentran en las 4 esquinas de ambos retículos, más el cuadrado central.
El montaje de la cámara debe realizarse con mucho
cuidado, pues cualquier detalle influye en el contaje de las células. Son
muchos los errores que se pueden cometer, pero si alguno de ellos ocurre se
debe desmontar la cámara, limpiar y volver a montar. Entre los principales
errores se pueden mencionar los siguientes:
Rebosar la cámara o realizar un llenado
insuficiente, dejar secar la cámara, intentar quitar el exceso de líquido con
gasa, inclinar la cámara al transportarla, llenar una cámara sucia o mojada, no
mezclar bien la dilución o la muestra, entre otros. Todos estos errores
darán como resultado un valor irreal.
Historia
La cámara de Neubauer es un instrumento de
precisión, y en el proceso de fabricación pasa por un estricto control de
calidad. Fue creada para el recuento preciso de partículas o elementos formes
por mm3, como por ejemplo células en diversos líquidos. Su delicada gráfica es tallada
con lápiz de diamante.
Características de la cámara de Neubauer
La cámara completa es del tamaño de un portaobjeto
normal para que pueda ser colocada en la platina del microscopio.
La cámara consta de tres superficies rectangulares
centrales (a, b, c). En la zona “b” está ubicada la zona R o zona de recuento,
también llamado retículo. Una a cada lado de la cámara, separados por la zona
“d”.
Esquema gráfico de la Cámara de Neubauer. Fuente: Guía práctica de Hematología. Escuela de Bioanálisis de la Universidad de Carabobo, Venezuela.
Cada retículo es una zona pulida que contiene
grabada la zona de contaje. Consta de un cuadrado con una superficie de 9 mm2 y
está dividido internamente en 9 cuadros con 1 mm2 de superficie
cada uno. Los cuatro cuadros de las esquinas están divididos en 16 cuadrículas
más pequeñas (0.0625 mm2 de superficie).
Estas cuadrículas se forman por una serie de líneas
milimetradas que se entrecruzan entre sí, constituyendo cuadrículas
perfectamente graficadas y delimitadas a las medidas que se han especificado.
Estas líneas han sido grabadas con punta de diamante.
Retículo de Neubauer mejorado. Fuente: Guía práctica de Hematología de la Escuela de Bioanálisis de la Universidad de Carabobo, Venezuela.
Los cuatro laterales corresponden a la zona de
recuento. En estos laterales o esquinas es donde se realiza el contaje de la
mayoría de las células (hematíes y leucocitos), mientras que las plaquetas se
cuentan en la zona central.
La zona central tiene más divisiones, consta de un cuadrado de 1 mm2 dividido en 25 cuadros que tienen una superficie de 0,04 mm2 cada uno. Estos a su vez se dividen en 16 cuadrículas con una superficie de 0,0025 mm2.
Descripción del retículo de Neubauer mejorado. a) Cuadrado de las esquinas, b) cuadrado central, c) cuadrado mediano del cuadrado central. Fuente: Guía práctica de Hematología de la Escuela de Bioanálisis de la Universidad de Carabobo, Venezuela.
La zona “a” y “c” sirven de soporte para colocar un
cubre objeto especial que recibe el nombre de laminilla hematimétrica o cubre
hematímetro.
La altura entre la laminilla y la superficie de
recuento es de 0,1 mm. Las medidas de la superficie de los cuadros de conteo,
así como la altura de la cámara y la dilución de la muestra, son datos
necesarios para realizar los cálculos finales.
Usos
Se utiliza para el contaje de células.
Especialmente es de gran ayuda en el área de hematología, ya que permite
realizar el contaje de las 3 series celulares sanguíneas; es decir glóbulos
rojos, glóbulos blancos y plaquetas.
Sin embargo, se puede usar en otras áreas, por
ejemplo, para contar espermatozoides, esporas, bacterias u otros elementos de importancia
dependiendo del tipo de muestra.
¿Cómo se usa?
Preparación de la muestra
Para realizar el recuento celular, por lo general
se parte de una dilución previa. Ejemplo: para contar glóbulos blancos se
prepara una dilución 1:20 con líquido de Turk. Se mezcla bien la dilución antes
de cargar la pipeta y montar la cámara de Neubauer.
Existen ocasiones en que una dilución 1:20 no es
suficiente para poder contar. Por ejemplo, en pacientes que sufren ciertos
tipos de leucemias crónicas. En estos casos se deben hacer diluciones más altas
como 1:100.
Si por el contrario el contaje es muy bajo, como en
las leucopenias severas, se pueden hacer diluciones más pequeñas para
concentrar la muestra. Ejemplo: se puede hacer una dilución 1:10.
Los cambios que se realicen influyen en los
cálculos.
Montaje de la cámara de Neubauer
La cámara de Neubauer se arma colocando en la zona
central la laminilla hematimétrica. Ambas deben estar muy limpias y secas. Para
colocar la laminilla esta, se toma por los bordes y se deja caer suavemente
sobre la cámara.
Esta se llena colocando la punta de una pipeta automática
o pipeta de Thoma en un ángulo de 35° en el borde de la zona de carga. Se va
descargando el líquido suavemente y la zona de carga se llena por capilaridad.
Esto se realiza por ambos lados para cargar los dos retículos.
No se deben sobrecargar los retículos y tampoco se
les debe negar líquido. La carga debe quedar exacta. Es importante que el
llenado se realice homogéneamente, es decir, no deben quedar burbujas.
Una vez montada la cámara se deja en reposo por 2
minutos para que las células precipiten al fondo y sea más fácil su
visualización y conteo.
Pasado el tiempo del reposo se monta en la platina
del microscopio de luz para su observación. Primero se enfoca con objetivo de
10X y si es necesario luego se pasa a 40X.
Para mejorar su visualización se disminuye el paso
de la luz del microscopio. Para ello se baja el condensador y se cierra un poco
el diafragma.
Contaje
Para el contaje de los glóbulos blancos o
leucocitos se debe contar toda la superficie de los cuatro cuadrados medianos
de las esquinas y el cuadrado central de cada retículo.
El contaje se inicia en el cuadrado de la esquina
izquierda superior. Se comienza desde el primer cuadrado de la primera fila, es
decir, de izquierda a derecha hasta llegar al extremo contrario.
Allí se baja y se devuelve la mirada de derecha a
izquierda hasta llegar al otro extremo y así sucesivamente se van contando las
células que hay dentro de cada cuadrícula en forma de zigzag. Se cuentan las 16
cuadrículas de cada cuadrado mediano.
Para evitar contar una célula dos veces existen
reglas sobre las células que se ubican sobre las líneas limítrofes de cada
cuadrícula. Las células que se ubiquen en las líneas izquierdas y superiores se
cuentan y las que se ubiquen sobre las líneas derechas e inferiores se ignoran.
Se debe disponer de un contador de células manual
para que el operador oprima la tecla del aparato tantas veces como células
observe. Con el uso del contador el operador puede contar sin necesidad de
levantar la mirada del campo microscópico. Al terminar el contaje observará el
total de células contadas.
Cálculos
Para los cálculos se puede proceder de varias
maneras. Se puede contar un solo retículo o se pueden contar los dos y se saca
un promedio de ambos. En estas dos situaciones las células contadas se deben
multiplicar por un factor, que en este caso sería 40. Y así se obtiene el
contaje total por mm3.
Pero si se cuentan los dos retículos y no se saca
promedio se debe multiplicar por un factor diferente, en este caso por 20.
-Factor de multiplicación
A continuación, se explica cómo se calcula el
factor de multiplicación.
Para los cálculos se toma en consideración varios
datos, entre ellos el título de la dilución, la altura de la cámara y la
superficie contada.
Dilución
La dilución que se utiliza de manera estándar es
1:20 para el contaje de leucocitos.
Altura de la cámara
La altura entre la cámara y la lámina hematimétrica
es de 0,1 mm.
Superficie contada
Si se cuentan 5 cuadrados de 1mm2 de
superficie, significa que la superficie total del contaje es de 5 mm2.
Este dato se debe multiplicar por la altura de la cámara para obtener el
volumen total contado. Es decir, 5 mm2 x 0,1 mm = 0,5 mm3.
Fórmulas y cálculos
Con los datos que se tienen se dice:
Si en 0,5 mm3 ——hay———n° de células
contadas
En 1 mm3 ——-habrá —- X n° de
células
X n° de células = (n° de células
contadas x 1) / 0,5 mm3
Pero se debe tomar en cuenta también la
dilución. Por tanto, la fórmula queda de la siguiente manera:
(n° de células contadas x 1) x 20/ 0,5 mm3
Finalmente, para resumir, se puede multiplicar el
n° de células contadas por 40. Así se obtiene el valor de leucocitos por mm3.
En caso de que se cuenten los dos retículos se
cambia el dato de la superficie contada que en este caso sería de 10 cuadrados,
es decir de 10 mm2. Y un volumen total contado de 1 mm3. La
fórmula quedaría:
(n° de células contadas x 1) x 20 / 1 mm3
Por tanto, en este caso el factor de multiplicación
sería 20.
Errores
-Si al cargar la cámara esta queda rebasada o
sobrepasada de líquido, la altura de la cámara variará. Esto trae como
consecuencia que el contaje dé más alto de lo real. Si se intenta quitar el
exceso con una gasa o algodón, esto representa un error garrafal. Esta acción
hará que las células se concentren, aumentando el contaje.
-Si se carga deficientemente, el contaje dará por
debajo de lo real.
-En caso de que se monte la cámara y se deje secar,
ya no es posible realizar el contaje debido a que emitirá resultados erróneos.
-Si antes de cargar la cámara no
se mezcla bien la dilución de la muestra, se corre el riesgo de que exista
error en la lectura, pues las células no estarán distribuidas de forma
homogénea. Por tanto, habrá menor o mayor concentración de células, dependiendo
si la muestra es tomada de la superficie del líquido o del fondo del tubo
respectivamente.
-La presencia de burbujas disminuye la cantidad de
líquido que debe entrar al retículo, interfiriendo con la correcta
visualización y distribución de las células. Todo ello afecta significativamente
los resultados.
-Durante el contaje, no levante la mirada del
microscopio hasta culminar cada cuadrado grande para evitar perderse.
-Un motivo de error es inclinar la cámara después
de montada. Por ello se debe subir con cuidado a la platina del microscopio.
Recomendación
Si por alguna razón usted detecta una anormalidad
en el llenado de la cámara, lo más recomendable es que desmonte esa
preparación, limpie la cámara y vuelva a montar desde cero.
Tenga mucho cuidado al limpiar la cámara para
evitar el rayado de los retículos. Por otra parte, tenga en cuenta que la
laminilla hematimétrica es delicada y frágil. Una manipulación inadecuada puede
romperla.
Antes de comenzar a contar asegúrese de que las
células hayan quedado bien distribuidas. Una distribución desigual de las
células ocurre por una mezcla deficiente de la muestra o la dilución. Si
esto llegase a suceder se debe repetir el montaje.
Una forma de saber si las células están bien
distribuidas es comparando el contaje de cada cuadrado grande, el número de
células contadas por cada cuadrado no debe ser exageradamente diferente entre
uno y otro.
-Si el contaje de glóbulos blancos da por encima de
50.000 mm3 es recomendable repetir el contaje, haciendo una
dilución mayor.
-Si modifica la dilución debe volver a calcular el
factor de multiplicación, ya que ello influye en la fórmula.
Referencias
1. Cardona-Maya
W, Berdugo J, Cadavid A. Comparación de la concentración espermática usando la
cámara de Makler y la cámara de Neubauer. Actas Urol Esp 2008;32
(4): 443-445. Disponible en: scielo.
2.
Cámara de
Neubauer. (2018, 27 de marzo). Wikipedia, La enciclopedia libre.
Fecha de consulta: 04:10, junio 23, 2019 desde es.wikipedia.org
3. Meneses
A, Rojas L, Sifontes S. Aplicación de un método alternativo de conteo en Cámara
de Neubauer para determinar la concentración de Trichomonas vaginalis. Rev. Cub
Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Disponible en: researchgate.net
4.
Gómez-Pérez
Roald E. Análisis del Espermograma. Rev. Venez. Endocrinol. Metab. 2007;
5 (2):19-20. Disponible en: ve.scielo
5. Guía
práctica de hematología de la Escuela de Bioanálisis de la Universidad de
Carabobo. Venezuela.1998
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